Антитіла молока і сироватки крові людини: характеристика каталітичної активності та вплив на ріст і виживання клітин

  • Добавили31.07.2012
  • Размер56,5 Kб
  • Скачали5
Сколько стоит заказать работу?

Виділення фрагментованої ДНК та її електрофорез у гелі агарози. Клітини після культивування із препаратами АТ осаджували центрифугуванням при 2000 об/хв протягом 5 хв. До осаду клітин додавали 0,5 мл холодного ЗФР та фіксували, поступово додаючи до суспензії клітин 5 мл холодного розчину 70% етанолу.

Клітини залишали на 12 год при - 20 °С (деякі зразки зберігали при даній температурі протягом 3-4 тижнів). Після цього клітини центрифугували при 2000 об/хв протягом 5 хв. Осад клітин (2-3 млн.

клітин) ресуспендовували у 40 мкл фосфат-цитратного буферу, який містив 192 частини 0,2 М Na2HPO4 та 8 частин 0,1 М лимонної кислоти, рН 7,8, та залишали при кімнатній температурі на 30 хв. Після центрифугування при 3000 об/хв протягом 5 хв надосадову рідину переносили у свіжу пробірку типу Еппендорф та додавали 3 мкл 0,25% водного розчину NP-40 („Sigma”, США) та 2 мкл РНК-ази А (розчин 10 мг/мл у воді). Після 1-годинної інкубації при 37 °С до суспензії додавали 5 мкл протеїнази К („Merck”, Німеччина) (розчин 1 мг/мл у воді) та інкубували 1 год при 37 °С.

Після інкубації до препарату ДНК додавали 12 мкл буферу, який містив 0,25% бромфенолового синього, 50 мМ трис-HCl, рН 7,5, 50% гліцерину і розділяли в 1% гелі агарози у присутності 0,005% етидію броміду при напрузі 4 В/см протягом 2 год. Фрагменти ДНК виявляли при ультрафіолетовому освітленні і фотографували цифровою камерою Nikon Coolpix 4200. Мікроелектрофорез ДНК окремих клітин у гелі агарози (метод ДНК-комет).

Аналіз здійснювали, як описано (Камінський та ін 2005). Для формування гелю, предметні скельця покривали плівкою агарози шляхом нанесення 2 мл 1% тугоплавкої агарози („Serva”, Німеччина) і висушування у термостаті при 37 °С. 40 мкл суспензії клітин вносили у пробірку типу Еппендорф і поміщали у водяну баню при 40 °С, змішували із 120 мкл розчину легкоплавкої агарози („Serva”, Німеччина) (кінцева концентрація агарози становила 0,75%), швидко наносили на теплі предметні скельця 150 мкл такої суміші і покривали теплим покривним скельцем.

Після застигання агарози обережно знімали покривне скельце .

Скачать
Реферат Культурология 23.10.2002

Дом и кров в славянофильской концепции

Кафедра философии МСХА Реферат аспирантки кафедры селекции и семеноводства овощных и плодовых культур Кондаковой Ольги по теме Дом и кров в славянофильской концепции. Москва, 1996 Дом относится к числу основополагающих, всеобъемлющих архетипических образов,

Реферат Медицина 22.07.2011

“Розподіл лікарської речовини в органах і тканинах”

Реферат на тему “Розподіл лікарської речовини в органах і тканинах” Внаслідок транспортування (абсорбції) речовини потрапляють у кров, а потім до різних органів і тканин. Вміст вільної (незв язаної) речовини у плазмі крові через певний проміжок часу після

Реферат Медицина 21.07.2011

“Види дії лікарської речовини. Побічна дія лікарських засобів”

Реферат на тему “Види дії лікарської речовини. Побічна дія лікарських засобів” 1. Види дії лікарської речовини Розрізняють пререзорбтивну (місцеву) і резорбтивну дію лікарських речовин. Пререзорбтивна дія - це комплекс ефектів, що виникають на місці застосування лікарського засобу.

Реферат Медицина 21.07.2011

“Функція гемолітичної системи”

Реферат на тему “Функція гемолітичної системи” ПЛАН 1. Склад, функції та значення крові 2. Особливості кровотворення 3. Захворювання системи кровотворення і крові 1. Склад, функції та значення крові Кров – рідка сполучна тканина. Основні функції 1.Дихальна

5ballov.qip.ru рекомендует:

  • Выбор ВУЗа

    С приходом лета начался период, когда выпускники школ выбирают куда пойдут учиться дальше. Конечно, это совсем не легкий выбор, но помочь в выборе может рейтинг вузов на нашем сайте. Также в этом разделе представлена вся нужная для абитуриентов информация.

  • Как сдать ЕГЭ

    Прежде, чем идти в выбранный вуз с документами, нужно сначала получить аттестат, который выдается после сдачи экзаменов. А подготовиться к ним можно в нашем разделе ЕГЭ. Там также представлены варианты за прошлые года.

  • Подготовка к ГИА

    Для девятиклассников не менее важно окончание учебного года. Их также ждет государственная итоговая аттестация. Подготовиться к ней можно на нашем сайте в разделе ГИА. Главное помнить: самоподготовка - это путь к успешной сдаче.

Облако тегов