Антитіла молока і сироватки крові людини: характеристика каталітичної активності та вплив на ріст і виживання клітин

  • Добавили31.07.2012
  • Размер56,5 Kб
  • Скачали5
Сколько стоит заказать работу?

Після завершення інкубації до реакційного середовища додавали денатуруючий буфер (2% Ds-Na, 50 мМ трис-НCl, рН 6,8, 4% 2-меркаптоетанол, 20% гліцерин) і білки розділяли електрофорезом у 10% ПААГ у присутності 0,1% Ds-Na. Гелі висушували і проводили їхню авторадіографію. Імуноензимний аналіз (ІЕА).

ІЕА проводили згідно описаної нижче методики. Для сорбції антигенів у лунки 96-лункового планшету для імунологічних аналізів вносили 30 мкл розчину, який містив 2 мкг гістонів або дволанцюгову ДНК у 0,1 М K2CO3/KHCO3, pH 8,6, й інкубували протягом 18 год при 4 °С. Лунки промивали (3 рази) 200 мкл буферу А (1% БСА у ЗФР), додавали 15 мкг антитіл у 200 мкл буферу А й інкубували протягом 2 год при 37 °С.

Лунки тричі промивали 200 мкл буферу А, додавали 50 мкл розчину кон'югату білок А - пероксидаза хрону ("Sigma", США) у розведенні 1: 500 й інкубували протягом 1 год при 37 °С. Лунки планшету тричі промивали 200 мкл ЗФР у присутності 0,05% Twin-20 і фарбували розчином діамінобензидин/Н2О2 протягом 30 хв при 37 °С. Реакцію зупиняли 1 М ортофосфорною кислотою.

Оптичну густину розчину визначали при довжині хвилі 492 нм на спектрофотометрі NanoDrop ND 1000 („NanoDrop Technologies”, США). Рівень ауто-АТ у лунках вираховували за величиною оптичного поглинання розчину забарвлених продуктів пероксидазної реакції. Визначення проводили у трьох паралельних дослідах.

Клітини та їхнє культивування. У роботі використовували клітинні лінії, одержані з колекції Інституту експериментальної патології, онкології та радіобіології НАН України: Jurkat - лейкемічні Т-лімфоцити периферичної крові людини, Namalwa - В-лімфоцити людини (лімфома Беркіта); L1210 - лейкемічні В-лімфоцити миші, L929 - трансформовані фібробласти миші. Клітини культивували у середовищі RPMI-1640 або DMEM („Sigma”,.

Скачать
Реферат Культурология 23.10.2002

Дом и кров в славянофильской концепции

Кафедра философии МСХА Реферат аспирантки кафедры селекции и семеноводства овощных и плодовых культур Кондаковой Ольги по теме Дом и кров в славянофильской концепции. Москва, 1996 Дом относится к числу основополагающих, всеобъемлющих архетипических образов,

Реферат Медицина 22.07.2011

“Розподіл лікарської речовини в органах і тканинах”

Реферат на тему “Розподіл лікарської речовини в органах і тканинах” Внаслідок транспортування (абсорбції) речовини потрапляють у кров, а потім до різних органів і тканин. Вміст вільної (незв язаної) речовини у плазмі крові через певний проміжок часу після

Реферат Медицина 21.07.2011

“Види дії лікарської речовини. Побічна дія лікарських засобів”

Реферат на тему “Види дії лікарської речовини. Побічна дія лікарських засобів” 1. Види дії лікарської речовини Розрізняють пререзорбтивну (місцеву) і резорбтивну дію лікарських речовин. Пререзорбтивна дія - це комплекс ефектів, що виникають на місці застосування лікарського засобу.

Реферат Медицина 21.07.2011

“Функція гемолітичної системи”

Реферат на тему “Функція гемолітичної системи” ПЛАН 1. Склад, функції та значення крові 2. Особливості кровотворення 3. Захворювання системи кровотворення і крові 1. Склад, функції та значення крові Кров – рідка сполучна тканина. Основні функції 1.Дихальна

5ballov.qip.ru рекомендует:

  • Выбор ВУЗа

    С приходом лета начался период, когда выпускники школ выбирают куда пойдут учиться дальше. Конечно, это совсем не легкий выбор, но помочь в выборе может рейтинг вузов на нашем сайте. Также в этом разделе представлена вся нужная для абитуриентов информация.

  • Как сдать ЕГЭ

    Прежде, чем идти в выбранный вуз с документами, нужно сначала получить аттестат, который выдается после сдачи экзаменов. А подготовиться к ним можно в нашем разделе ЕГЭ. Там также представлены варианты за прошлые года.

  • Подготовка к ГИА

    Для девятиклассников не менее важно окончание учебного года. Их также ждет государственная итоговая аттестация. Подготовиться к ней можно на нашем сайте в разделе ГИА. Главное помнить: самоподготовка - это путь к успешной сдаче.

Облако тегов